文库定量试剂盒包含了用于qPCR绝对定量的NGS文库扩增所需的所有试剂。为Illumina®及Ion TorrentTM平台测序文库提供了可靠的，基于qPCR的定量方案。试剂盒所提供的所有试剂都经过了严格的质量控制，最大程度上保证了不同批次间实验结果的可重复性。

试剂盒的工作原理

        使用含有靶向接头序列、平台特异性的qPCR 引物和DNA标准品进行qPCR反应，将已知浓度DNA标准品的平均Cq值左图，生成标准曲线，将稀释文库的平均Cq值转换为浓度，从而算出每个文库的浓度。

        本品是针对Illumina®平台高通量测序文库浓度绝对定量而设计的。 不论以使用何种方式构建，只要文库末端包含Illumina® p5和p7芯片结合序列、长度不超过1 kb 且浓度不低于0.006 pM，都可以使用本品进行绝对定量。此外，本品还可用于检测实验环境中文库污染程度。

        p5：5'-AATGATACGGCGACCACCGA-3'；p7：5'-CAAGCAGAAGACGGCATACGA-3'。

图：qPCR文库定量与 2100\Qubit 检测结果的差异

        如图所示：NGS测序文库构建过程中，adaptoar 连接可能存在单端加入接头的情况，也有一些完全没有加上接头的片段存在，这使得上机前的定量时存在了误差的风险，导致混样不均，数据量少或者存在偏差，参差不齐；

        目前受检测平台的限制，Agilent Bioanalyzer 2100,Qubit（PicoGreen） 或者Nanodrop 都不能分清楚能否正确的加入测序接头，测出的结果都是实际DNA的浓度，而不是有效（含接头）DNA浓度。 q-PCR文库定量试剂，是通过与测序引物完全匹配的引物扩增检测，有效DNA的浓度，通过建立标准曲线，精确计算产物的浓度，然后进行混样测序，达到数据均匀的目的。