pLVX-LexA-EGFP-CD63 质粒

产品简介

          pLVX-LexA-EGFP-CD63，即Lentivirus expressing EGFP-CD63 fusion protein，是艾基自行研发的一种可以在大多数哺乳动物细胞(包括原代细胞和干细胞)中通过CMV启动子表达人源CD63-EGFP融合蛋白的重组慢病毒。本产品可用于外泌体的示踪研究，用于研究外泌体的形成、分泌、靶向和运输机制。本产品带有嘌呤霉素 (Puromycin)抗性基因，感染细胞后可以使用嘌呤霉素筛选稳定株。

          外泌体(Exosome)是膜包裹的细胞外囊泡(Extracellular vesicles, EVs)，直径约为40-160nm，具有脂质双分子层结构，天然存在于血液、尿液、脑脊液，以及体外培养细胞的上清液中[1]，几乎所有类型的细胞都可以产生并释放外泌体[2]。如图1所示，细胞膜内吞(Endocytosis)依次形成初级内体 (Early sorting endosome ESE)、次级内体(Late sorting endosome , LSE) 和多囊泡体(Multivesicular body, MVB) ，其中多囊泡体包含腔内囊泡(Intraluminal vesicles, ILVs) 。多囊泡体与细胞膜融合形成外泌体，外泌体携带多种来自其母体细胞的成分(包括核酸、蛋白质、脂类和代谢物等)释放到胞外基质中[3]。外泌体可以被附近或远距离的细胞识别和融合，是细胞间进行相互调控的重要媒介，参与了癌症、神经退行性病变和炎症性疾病等多种疾病的发病过程，影响细胞多方面的的功能[4-5]。

图1. 外泌体的形成原理及其携带的母体细胞成分示意图。

          外泌体标志蛋白（Protein biomarkers for exosome），也称外泌体蛋白标志物（Protein markers for exosome），可以用于鉴定、观察、标记和纯化外泌体。据外泌体库 ExoCarta（http://www.exocarta.org）统计，来自不同生物、细胞类型和体液的外泌体中已发现 9769 种蛋白质，ExoCarta 列出了 100 种常见外泌体蛋白标志物（http://exocarta.org/exosome_markers_new），其中 CD9、CD63、CD81、ALIX、Flotillin、Ceramidase 和 TSG101 是最常用的外泌体蛋白标志物（如图 2 所示）。CD63 在人体中由 CD63 基因编码的蛋白质抗原，是跨膜四超家族（Transmembrane 4 superfamily）成员之一，为中次跨膜蛋白 [1]，大量存在于细胞外囊泡的表面，也会出现在普通的细胞膜表面。CD63 是最常用的外泌体蛋白标志物之一，被认为是调控细胞外囊泡产生和胞内物质分选的关键因子 [6] 。

图2. 常见的外泌体蛋白标志物示意图。

Ø pLVX-LexA-EGFP-CD63感染HEK293T细胞后的表达效果如图3所示

TU                                                          1×10^5                                                          1×10^6

图 3. 艾基生产的pLVX-LexA-EGFP-CD63感染HEK293T细胞的效果图. 24孔板每孔100,000个细胞，

培养过夜后用相应的病毒TU数进行感染，病毒感染72小时后荧光显微镜实拍相同大小视野效果图。

实际检测效果会因检测仪器、实验条件的不同而存在差异，本图仅供参考。

       pLVX-LexA-EGFP-CD63质粒的主要信息如下：

        pLVX-LexA-EGFP-CD63质粒(9855bp)的图谱如下：

        pLVX-LexA-EGFP-CD63质粒中没有的酶切位点包括：

        AbsI, AfeI, AgeI, AhlI, AjuI, AlfI, AloI, Aor51HI, AscI, AsiGI, AsiSI, AsuII,

        BaeI, BarI, BclI, BcuI, BoxI, Bpu14I, BshTI, Bsp119I, BspT104I, BssNAI,

        Bst1107I, BstBI, BstHPI, BstPAI, BstXI, BstZ17I, CciNI, Csp45I, CspAI, Eco47III,

        EcoT22I, FbaI, FspAI, HpaI, I-CeuI, I-PpoI, I-SceI, Ksp22I, KspAI, MauBI,

        Mph1103I, MreI, MssI, NotI, NsiI, NspV, PacI, PaeR7I, PalAI, PasI, PI-PspI,

        PI-SceI, PinAI, PmeI, PshAI, PspXI, PsrI, RgaI, SbfI, SdaI, SfaAI, SfiI,

        Sfr274I, SfuI, SgfI, SgrAI, SgsI, SlaI, SmiI, SpeI, SrfI, Sse8387I, SwaI, XbaI,

        XcmI, XhoI, Zsp2I

        pLVX-LexA-EGFP-CD63质粒单酶切位点包括：

        AhdI, ApaI, AvrII, BamHI, BfuAI, BlpI, BmgBI, BmtI, BsaBI, BsiWI, BspDI, BspMI,

        BsrGI, BstEII, Bsu36I, ClaI, CsiI, DrdI, EcoRI, FseI, FspI, KflI, MfeI, MluI,

        NdeI, NheI, NruI, PaqCI, PflFI, PpuMI, PspOMI, PstI, PvuI, RsrII, SexAI, SgrDI,

        SmaI, SnaBI, SphI, SspI, TspMI, Tth111I, XmaI

        pLVX-LexA-EGFP-CD63质粒推荐使用的测序引物序列如下：

        CMV-F primer (2659-2679): 5'-CgCAAATgggCggTAggCgTg-3'

        pLVX-LexA-EGFP-CD63的全序列信息请参考艾基网站上该质粒的信息。

包装清单

保存条件

        -80ºC保存。

注意事项

        本质粒未经艾基书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

          本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

        为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

1. 首次使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。

2. 100µg包装的本产品质粒浓度为0.25µg/µl，共400µl。可以直接用于转染细胞。